Monkeypox Virus Real Time PCR rinkinys
Produkto Aprašymas
Paskirtis
Jis naudojamas beždžionių raupų virusui aptikti žmogaus serumo arba pažeidimo eksudato mėginiuose, naudojant realaus laiko PGR sistemas.
Testo principas
Šis produktas yra fluorescenciniu zondu pagrįsta Taqman® realaus laiko PGR tyrimo sistema.Konkretūs pradmenys ir zondai yra skirti beždžionių raupų viruso F3L geno aptikimui.Vidinė kontrolė, nukreipta į žmogaus išsaugotą geną, stebi mėginių paėmimą, mėginių tvarkymą ir realaus laiko PGR procesą, kad išvengtų klaidingai neigiamų rezultatų.Rinkinys yra visiškai iš anksto sumaišyta liofilizuota sistema, kurią sudaro beždžionių raupų viruso aptikimui reikalingos medžiagos: nukleorūgščių amplifikacijos fermentas, UDG fermentas, reakcijos buferis, specifinis pradmuo ir zondas.
Pagrindinis turinys
Pateikti komponentai yra išvardyti lentelėje.
| Komponentai | Paketas | Ingredientas |
| Beždžionių raupų virusasLiofilizuotas premiksas | 8 juostiniai PGR vamzdeliai× 6 maišeliai | Pradmenys, zondai, dNTP/dUTP mišinys, Mg2+, Taq DNR polimerazė, UDG fermentas |
| MPV teigiama kontrolė | 400 μL × 1 vamzdelis | DNR sekos, turinčios tikslinį geną |
| MPV neigiama kontrolė | 400 μL × 1 vamzdelis | DNR sekos, turinčios žmogaus geno segmentą |
| Tirpinamasis tirpalas | 1 ml × 1 mėgintuvėlis | Stabilizatorius |
| Atitikties sertifikatas | 1 gabalėlis | / |
Operacija Srautas
1. PavyzdysKolekcija:Mėginius reikia surinkti į sterilius mėgintuvėlius pagal
su standartinėmis techninėmis specifikacijomis.
2. Reagento paruošimas (reagento paruošimo sritis)
Išimkite rinkinio komponentus, subalansuokite juos kambario temperatūroje, kad galėtumėte naudoti budėjimo režimu.
3. Mėginių apdorojimas (mėginių apdorojimo sritis)
3.1 Nukleino rūgšties ekstrahavimas
Nukleino rūgščių ekstrakcijai rekomenduojama paimti 200 μL skystų mėginių, teigiamos kontrolės ir neigiamos kontrolės, atsižvelgiant į atitinkamus virusinės DNR išskyrimo rinkinių reikalavimus ir procedūras.
3.2 Liofilizuotų miltelių ištirpinimas ir šablono pridėjimas
Paruoškite Monkeypox Virus liofilizuotą premiksą pagal mėginių skaičių.Vienam mėginiui reikia vieno PGR mėgintuvėlio su liofilizuotu premikso milteliais.Neigiama kontrolė ir teigiama kontrolė turėtų būti traktuojamos kaip du mėginiai.
(1) Į kiekvieną PGR mėgintuvėlį, kuriame yra liofilizuotas premiksas, įpilkite 15 μL tirpiklio, tada atitinkamai į kiekvieną PGR mėgintuvėlį įpilkite 5 μL ekstrahuotų mėginių / neigiamos kontrolės / teigiamos kontrolės.
(2) Sandariai uždenkite PGR mėgintuvėlius, braukite PGR mėgintuvėlius ranka, kol liofilizuoti milteliai visiškai ištirps ir susimaišys, surinkite skystį į PGR mėgintuvėlių dugną momentiniu centrifugavimu mažu greičiu.
(3) Jei aptikimui naudojate įprastą realaus laiko PGR prietaisą, tiesiogiai perkelkite PGR mėgintuvėlius į amplifikacijos sritį;jei aptikimui naudojate BTK-8, tuomet reikia atlikti tokias operacijas: iš PGR mėgintuvėlio įpilkite 10 μL skysčio į BTK-8 reakcijos lusto šulinį.Vienas PGR mėgintuvėlis atitinka vieną lusto duobutę.Pipetavimo metu įsitikinkite, kad pipetė yra 90 laipsnių vertikaliai.Aerozolio barjero pipetės antgaliai turi būti dedami į duobės centrą su vidutine jėga ir nustokite stumti pipetę, kai ji pasiekia pirmą pavarą (kad nesusidarytų burbuliukų).Užpildę duobutes, išimkite reakcijos lusto membraną, kad ji uždengtų visas duobutes, ir lustas perkeliamas į amplifikacijos aptikimo sritį.
4. PGR amplifikacija (aptikimo sritis)
4.1 Įdėkite PGR mėgintuvėlius / reakcijos lustą į reakcijos baką ir atitinkama tvarka nustatykite kiekvieno reakcijos šulinio pavadinimus.
4.2 Aptikimo fluorescencijos nustatymai: (1) beždžionių raupų virusas (FAM);(2) Vidaus kontrolė (CY5).
4.3 Vykdykite šį važiavimo dviračiu protokolą
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio protokolas:
| Žingsniai | Temperatūra | Laikas | Ciklai | |
| 1 | Išankstinė denatūracija | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denatūravimas | 95 ℃ | 10 s | 45 |
| Atkaitinimas, pratęsimas, fluorescencijos gavimas | 60 ℃ | 30 s | ||
BTK-8 protokolas:
| Žingsniai | Temperatūra | Laikas | Ciklai | |
| 1 | Išankstinė denatūracija | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denatūravimas | 95 ℃ | 5 s | 45 |
| Atkaitinimas, pratęsimas, fluorescencijos gavimas | 60 ℃ | 14 s | ||
5. Rezultatų analizė (žr. prietaiso naudotojo vadovą)
Po reakcijos rezultatai bus automatiškai išsaugomi.Norėdami analizuoti, spustelėkite „Analizuoti“ ir prietaisas automatiškai interpretuos kiekvieno mėginio Ct vertes rezultatų stulpelyje.Neigiami ir teigiami kontrolės rezultatai turi atitikti toliau pateiktą "6. Kokybės kontrolė".
6. Kokybės kontrolė
6.1 Neigiama kontrolė: Nėra Ct arba Ct>40 FAM kanale, Ct≤40 CY5 kanale su normalia stiprinimo kreive.
6.2 Teigiamas kontrolė: Ct≤35 FAM kanale su normalia stiprinimo kreive, Ct≤40 CY5 kanale su normalia stiprinimo kreive.
6.3 Rezultatas galioja, jei tenkinami visi aukščiau pateikti kriterijai.Priešingu atveju rezultatas neteisingas.
Rezultatų interpretacija
Galimi šie rezultatai:
| FAM kanalo Ct vertė | CY5 kanalo Ct vertė | Interpretacija | |
| 1# | Nėra Ct arba Ct>40 | ≤40 | Beždžionių raupų virusas neigiamas |
| 2# | ≤40 | Bet kokie rezultatai | Teigiamas beždžionių raupų virusas |
| 3# | 40–45 | ≤40 | Pakartotinis bandymas;jei vis dar yra 40–45, praneškite kaip 1# |
| 4# | Nėra Ct arba Ct>40 | Nėra Ct arba Ct>40 | Neteisinga |
PASTABA: Jei gaunamas neteisingas rezultatas, mėginys turi būti paimtas ir patikrintas dar kartą.
Užsakymo informacija
| produkto pavadinimas | Katė.Nr | Dydis | Pavyzdys | Galiojimo laikas | Trans.& Sto.Temp. |
| Monkeypox Virus Real Time PCR rinkinys | B001P-01 | 48 testai/komplektas | Serumas / pažeidimo eksudatas | 12 mėnesių | -25–15 ℃ |
